För mycket mall i pcr

Mängden totalt DNA i en PCR har en markant effekt på resultatet av ett PCR -förfarande. Att använda för mycket totalt DNA resulterar i packat DNA i reaktionskärlets begränsade utrymme och kan leda till falsk priming och till och med dålig DNA -syntes på grund av den hindrade spridningen av stora Taq -polymerasmolekyler.

1. Hur mycket mall ska jag lägga till i PCR?
2. Kan för mycket primer hämma PCR?
3. Vad kan orsaka att en PCR -reaktion misslyckas?
4. Hur mycket DNA räcker för PCR?

Hur mycket mall ska jag lägga till i PCR?

Även om det i teorin skulle räcka med en molekyl i mallen används vanligtvis större mängder DNA för en klassisk PCR, till exempel upp till 1 µg genomiskt däggdjurs -DNA och så lite som 1 pg plasmid -DNA (1).

Kan för mycket primer hämma PCR?

Föroreningar i dNTP -blandningen kan leda till ofullständig eller felaktig amplifiering eller PCR -hämning. Använd dNTP av hög kvalitet. Att använda en överdriven koncentration av primers kan öka risken för att primers bindas ospecifikt till oönskade platser på mallen eller till varandra.

Vad kan orsaka att en PCR -reaktion misslyckas?

Att bara glömma en komponent i PCR -reaktionen, oavsett om det är DNA -polymeras, primers eller till och med mall -DNA, kommer att resultera i en misslyckad reaktion. Den enklaste lösningen är att upprepa reaktionen. ... Om det fortfarande inte finns någon PCR -produkt efter detta är chansen stor att det finns något annat som hindrar din reaktion.

Hur mycket DNA räcker för PCR?

I en typisk 50 µl reaktion är 1-2 enheter av DNA -polymeras tillräckliga för amplifiering av mål -DNA. Det kan dock vara nödvändigt att justera enzymmängderna med svåra mallar. Till exempel när hämmare finns i DNA -provet kan ökad mängd DNA -polymeras förbättra PCR -utbyten.