Takara pcr felsökning

Istället måste PCR -villkoren optimeras; tänk på följande när du justerar PCR -villkoren:

1. Minska mängden mall.
2. Öka glödgningstemperaturen.
3. Använd touchdown PCR.
4. Minska antalet PCR -cykler.
5. Designa om primrarna.
6. Använd kapslade primrar.
7. Förstärka produkten på nytt.

1. Varför fungerar inte min PCR?
2. Hur optimerar du PCR -förhållanden?
3. Vad orsakar smetning i PCR?
4. Hur vet du om PCR är förorenat?

Varför fungerar inte min PCR?

Att bara glömma en komponent i PCR -reaktionen, oavsett om det är DNA -polymeras, primers eller till och med mall -DNA, kommer att resultera i en misslyckad reaktion. Den enklaste lösningen är att upprepa reaktionen. ... Om det fortfarande inte finns någon PCR -produkt efter detta är chansen stor att det finns något annat som hindrar din reaktion.

Hur optimerar du PCR -förhållanden?

PCR -villkor

1. Använd högre denatureringstemperaturer (t.ex.g., 98 ° C i motsats till 94 ° C eller 95 ° C) för att möjliggöra fullständig denaturering av mallen.
2. Håll glödgningstider för GC-rika mallar så korta som möjligt.
3. Använd primers med högre T_m (>68 ° C), eftersom glödgning kan ske vid en högre temperatur.

Vad orsakar smetning i PCR?

DNA -kontaminering, RNA i DNA -prov, hög koncentration av DNA i PCR -reaktionen kan orsaka utstrykning. ... DNA -smetning orsakas vanligtvis i växter på grund av hög koncentration av mall -DNA.

Hur vet du om PCR är förorenat?

För att kontrollera lösningen för kontaminering, montera negativa kontrollreaktioner med nya reagenser som man inte vet är kontaminerade och tillsätt en av de misstänkta lösningarna till varje reaktion. Den reaktionen visar förstärkta produkter som tyder på kontaminering är ett bevis på att den tillsatta lösningen var kontaminerad.