Topmusicanswers
Justera glödgningstemperaturerna, eftersom höga koncentrationer av PCR-tillsatser eller samlösningsmedel försvagar primerbindningen till målet. Öka mängden DNA -polymeras, eller använd DNA -polymeraser med hög processivitet.
...
- Sekvensfel vid terminaler av PCR -produkter.
- Falsk positiv förstärkning.
- Resurser.
- Vilka är de vanliga felsökningarna som kan uppstå i PCR?
- Varför fungerar inte min PCR?
- Vad orsakar PCR -utsmetning?
- Vad händer om glödgningstemperaturen är för hög?
Vilka är de vanliga felsökningarna som kan uppstå i PCR?
PCR -felsökningsguide
| Problem | Orsaker |
|---|---|
| Låg eller ingen PCR -produktutbyte | Termocyklerprogramglödgning och förlängningstemperaturer är inte optimala |
| Reaktion saknas Taq -polymeras eller annan reaktionskomponent | |
| Primerkoncentrationen är för låg | |
| Målsekvensen finns inte i DNA -mall |
Varför fungerar inte min PCR?
Att bara glömma en komponent i PCR -reaktionen, oavsett om det är DNA -polymeras, primers eller till och med mall -DNA, kommer att resultera i en misslyckad reaktion. Den enklaste lösningen är att upprepa reaktionen. ... Om det fortfarande inte finns någon PCR -produkt efter detta är chansen stor att det finns något annat som hindrar din reaktion.
Vad orsakar PCR -utsmetning?
DNA -kontaminering, RNA i DNA -prov, hög koncentration av DNA i PCR -reaktionen kan orsaka utstrykning. ... DNA -smetning orsakas vanligtvis i växter på grund av hög koncentration av mall -DNA.
Vad händer om glödgningstemperaturen är för hög?
Glödgningstemperaturen var för hög
Om glödgningstemperaturen är för hög kan primers inte binda till mallen. Tumregeln är att använda en glödgningstemperatur som är 5 ° C lägre än Tm av primern.
