Topmusicanswers
- Varför finns det ingen förstärkning i PCR?
- Varför förstärktes inte mitt DNA?
- Vad händer om primers inte läggs till PCR?
- Hur fixar du icke -specifik amplifiering i PCR?
Varför finns det ingen förstärkning i PCR?
Otillräcklig förstärkning kan resultera om den ursprungliga mängden mall är för låg. Öka antalet förstärkningscykler i steg om 5, eller, om möjligt, öka mängden mall. Föroreningar i dNTP -blandningen kan leda till ofullständig eller felaktig amplifiering eller PCR -hämning. Använd dNTP av hög kvalitet.
Varför förstärktes inte mitt DNA?
1) du kan ha dålig primer -design eller reaktionsstandardisering (utvärdera din primer -design och gör, som andra redan sagt, en gradient -PCR för att utvärdera olika glödgningstemperaturer); 2) Inget DNA (ditt extraktionsprotokoll kan ha misslyckats) och så kan dina primers bara glöda för varandra (eller tappa dem).
Vad händer om primers inte läggs till PCR?
Fråga: Om du glömde att lägga till primers till din PCR -reaktion, vad skulle hända och varför? 1. Din reaktion skulle misslyckas eftersom Taq -polymeras inte kan tillsätta baser utan att en liten bit DNA redan finns. ... Din reaktion skulle misslyckas eftersom det inte skulle finnas något enzym som skulle kunna lägga till nya nukleotidbaser.
Hur fixar du icke -specifik amplifiering i PCR?
Använd färre cykler när mallkoncentrationen är hög och använd fler cykler när mallkoncentrationen är låg. 2. Förlängningstiden var för lång: Överdriven förlängningstid kan tillåta ospecifik förstärkning. Använd i allmänhet en förlängningstid på 1 min/kb.
