Topmusicanswers
- Vilka problem kan uppstå från PCR -förstärkning?
- Varför finns det ingen förstärkning i PCR?
- Vad orsakar amplifiering i PCR?
- Vad orsakar PCR -fel?
Vilka problem kan uppstå från PCR -förstärkning?
Många av de vanliga problemen med PCR och RT-PCR identifieras under agarosgelelektrofores av reaktionsprodukterna. Dessa inkluderar frånvaron av den förväntade förstärkningsprodukten, förekomsten av ospecifika produkter, överdriven utsmetning och närvaron av ett "primer dimer" -band.
Varför finns det ingen förstärkning i PCR?
DNA -polymerasenzym fungerar inte
DNA -polymerasenzymet ansvarar för förlängningen av de bundna primrarna längs mall -DNA -strängarna. Om detta enzym inte längre är lika effektivt, kanske på grund av frysning, kommer förlängningssteget under PCR-reaktionen att vara ofullständig, vilket ger dig ingen PCR-produkt.
Vad orsakar amplifiering i PCR?
Grundläggande PCR. PCR -processen utvecklades ursprungligen för att förstärka korta segment av en längre DNA -molekyl (Saiki et al. 1985). En typisk amplifieringsreaktion inkluderar mål -DNA, ett termostabilt DNA -polymeras, två oligonukleotidprimrar, deoxynukleotidtrifosfater (dNTP), reaktionsbuffert och magnesium.
Vad orsakar PCR -fel?
Vanligtvis är det första forskare gör att skylla på ett defekt enzym eller reagens när ett experiment misslyckas, men med PCR är det faktiskt mindre sannolikt att det är orsaken till misslyckande. Oftare är djupare interna problem som primer -design, termocyklerparametrar eller ospecifik bindning till andra mallsekvenser orsaken.
